Di seguito la composizione ufficiale dei gironi del campionato di Prima Categoria pugliese 2020/21:
GIRONE A
- Atletico Peschici
- Audace Cagnano
- Nuova Daunia
- Real San Giovanni
- Real Sannicandro
- Real Zapponeta
- Stornarella
- Trinitapoli
- Troia
- Virtus Andria
- Virtus Bisceglie
- Virtus Molfetta
- Virtus Palese
- Virtus San Ferdinando
GIRONE B
- Atletico Martina
- Atletico Pezze
- Ceglie
- Don Bosco Manduria
- Football Club Santeramo
- Hellas Laterza
- Ideale Bari
- Latiano
- Levante Azzurro
- Lizzano
- Noci
- Noja
- Ragazzi Sprint Crispiano
- San Giorgio
- Tre Colli
GIRONE C
- Capo di Leuca
- Cedas Avio Brindisi
- Copertino
- Cursi
- Futura Monteroni
- Mesagne
- Real Galatone
- Ruffano
- Salve
- San Vito
- Seclì
- Soccer Dream Parabita
- Soleto
- Virtus Lecce
- Zollino
Le rispettive composizioni sono state stabilite in base a criteri di prossimità geografica, tenuto conto anche della facilità di collegamento fra le sedi in cui si svolgeranno gli incontri.